diagnóstico in-vitro

Microarreglo allergen chip Las novedosas herramientas de diagnóstico molecular abren nuevas posibilidades para estudiar la relación entre sensibilización a diferentes componentes alergénicos de los ácaros de  polvo doméstico y el desarrollo del asma. Ver más…


Curso: “MÉTODOS AVANZADOS DE ALERGOLOGÍA EXPERIMENTAL”

11na edición, 2015, del 20 al 30 de abril

Extensión y horarios:

Duración: 70 h (36h de conferencias, 34h de prácticas demostrativas)

De lunes a viernes de 8:30 am a 5:30 pm. (horario de almuerzo: 1:30-2:30 pm)

Sede:

Dpto de Alergenos, BIOCEN, Bejucal, Mayabeque, Cuba.

BIOCEN se encuentra 30 km al sur del centro de la ciudad de La Habana, aproximadamente 10 km al sur del Aeropuerto Internacional “José Martí”

Objetivo:

Dirigido a Médicos Especialistas o Residentes de las especialidades de Alergia e Inmunología y otros médicos y profesionales vinculados a las enfermedades alérgicas. Aborda los conocimientos y métodos experimentales más actuales, incluyendo métodos de laboratorio y de investigación clínica, con énfasis en técnicas inmunológicas aplicadas a la caracterización de alergenos, las vacunas de alergenos, al diagnóstico específico de la alergia, al estudio de la respuesta inmunitaria alérgica y la  inmunoterapia alergeno-específica. El curso  promueve una visión científica y actualizada sobre el empleo de la inmunoterapia y se adentra en aspectos metodológicos de los ensayos clínicos en este tema

Participantes: 10 alumnos

Temas:

Biología de los alergenos Profesores
1.    Alergenos de ácaros. Características bioquímicas y alergénicas DrC Alexis Labrada
2.    Biología molecular de los alergenos. Actividad biológica y alergenicidad DrC Alexis Labrada
3.    Reactividad cruzada entre alergenos MSc Bárbara Fernández
4.    Ecología del polvo doméstico MSc. Bárbara Fernández
5.    Sistemática de los ácaros del polvo doméstico. MSc. Bárbara Fernández
6.    Alergenos de alimentos MSc. Maytee Mateo
7.    Práctica: Identificación, aislamiento y cultivo de ácaros alergénicos. MSc Bárbara Fernández
Vacunas y extractos alergénicos
8.    Vacunas de Alergenos: perspectiva histórica DrC Alexis Labrada
9.    Introducción a la tecnología farmacéutica de fabricación de vacunas de alergenos. DrC Alexis Labrada
10.  Métodos de estandarización de productos alergénicos. DrC Alexis Labrada
11.  Aspectos regulatorios para productos alergénicos. Registro sanitario. 2h DrC Alexis Labrada
12.  Manejo aséptico de productos estériles y preparaciones oficinales o dispensariales. MSc Arelis Más
13.  Estabilidad de los alergenos. MSc Arelis Más
14.  Formulaciones para extractos alergénicos. Vías inyectable y sublingual. MSc Arelis Más
15.  Práctica: Determinación de la composición de proteínas en extractos alergénicos (SDS-PAGE) MSc. Arelis Más, Téc. Raisa Cruz
16.  Práctica: ELISA de inhibición de IgE (determinación de potencia alergénica in-vitro) MSc. Wendy Ramírez, Lic. Yunia Oliva
17.  Práctica: Preparación de diluciones de las vacunas VALERGEN para inmunoterapia. Lic. Yunia Oliva, Lic. Damaris Torralba
Elementos de Biotecnología aplicados a la Alergología
18.  Introducción a la tecnología del ADN recombinante. DrC Alexis Labrada
19.  Herramientas bioinformáticas básicas en Alergia, 2h DrC Alexis Labrada
20.  Introducción a la tecnología de los anticuerpos monoclonales y aplicaciones en alergia MSc Wendy Ramírez
21.  Introducción a los ensayos inmunoenzimáticos. Lic. Roxana Samalea
22.  Práctica: Determinación de alergenos de ácaros mediante ELISA con anticuerpos monoclonales. MSc Bárbara Fernández, Téc. Bárbara Luis
Diagnóstico alergeno-específico
23.  Conceptos básicos del diagnóstico específico de las enfermedades alérgicas. Sensibilidad y Especificidad. Dr. Raúl L. Castro
24.  Métodos de diagnóstico in-vivo. Diseño de Ensayos Clínicos de extractos alergénicos para diagnóstico. Dr. Raúl L. Castro
25.  Métodos de diagnóstico in-vitro. IgE específica. DrC. Alexis Labrada
26.  Evaluación de la respuesta inmunológica celular. MSc. Wendy Ramírez
27.  Práctica: ELISA para IgE específica. MSc. Mayteé Mateo; Lic. Yunia Oliva
28.  Práctica: Western Blotting IgE. MSc. Arelis Más, Téc Raysa Cruz
29.  Práctica: Punción cutánea cuantitativa. Dr. Raúl L. Castro, Lic. Yunia Oliva y Lic. Damaris Torralba
Inmunoterapia e Inmunología de las enfermedades alérgicas
30.  Inmunorregulación de las enfermedades alérgicas. Mecanismos de la inmunoterapia alergeno específica. Dra. Mary Carmen Reyes
31.  Immunidad innata y presentación antígénica. Papel en la respuesta alérgica Dra. Mary Carmen Reyes
32.  Avances en la comprensión de la respuesta IgE: implicaciones para la reactividad cruzada y la inmunoterapia. DrC Alexis Labrada
33.  Eficacia y seguridad de la Inmunoterapia. Pautas de inmunoterapia. Dr. Raúl L. Castro
34.  Inmunoterapia por vías alternativas. IT sublingual. Dr. Raúl L. Castro
35.   Variables de eficacia clínica en ensayos clínicos de IT Dr. Raul L. Castro
36.  Reacciones adversas a la inmunoterapia. Clasificación y Reporte MSc. Maytee Mateo
37.  Metodología de Ensayos Clínicos de Inmunoterapia. Dra. Mary Carmen Reyes
38.  Introducción al diseño experimental y la metodología de la investigación en alergología DrC. Alexis Labrada
39.  Vacunas de alergenos de nueva generación. Adyuvantes. DrC. Alexis Labrada
40.  Modelos animales de enfermedades alérgicas. MSc. Wendy Ramírez

Profesores:

1-    Alexis Labrada Rosado, Dr en Ciencias de la Salud, Investigador Titular, Jefe de Dpto de Alergenos

2-    Raúl Lázaro Castro, Dr Med., Especialista II grado en Alergia, MSc en enfermedades infecciosas, Profesor Auxiliar

3-    Wendy Ramírez, MSc Bioquímica, Biotecnóloga

4-    Bárbara Fernández, Lic. Microbiología, MSc Ecología (Acárologa), Biotecnóloga

5-    Mary Carmen Reyes. Dr Med., Especialista I grado en Inmunología

6-    Arelis Más, Máster en Ciencias Farmacéuticas

7-    Maytee Mateo, MSc en Biotecnología

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Willumsen N,, Holm J, Chrietensen IH, Wurtzen PA, Lund K. The complexity of allergic patients’s IgE repertoire correlates with serum concentreation of allergen-specific IgE. Clin Exp Allergy 2012;42:1227-36.

Los anticuerpos IgE son los responsables de las reacciones alérgicas. Los mismos reconocen diferentes epítopes en las moléculas alergénicas. La respuesta alérgica desde el punto de vista clínico, dependería tanto de la cantidad o concentración de anticuerpos IgE alergeno-específicos presentes en la sangre u otros tejidos, como de su afinidad y repertorio, o sea, conjunto de especificidades hacia diferentes epítopes  de una misma o diferentes moléculas alergénicas. Un artículo reciente de Willumsen y col., comentado por una editorial de la revista Clinical and Experimental Allergy (Kleine-Tebe J. Old questions and novel clues: Complexity of IgE repertoires. Clin Exp Allergy 2012;42:1142-5) aborda este actual problema.
El estudio empleo sueros de pacientes alérgicos a ácaros y evaluó su capacidad de formar complejos IgE-Der p 2 unidos al receptor de IgE CD23 sobre la membrana de los linfocitos B, y de esa forma desatar la llamada “Presentación Facilitada por IgE” o FAP en inglés, la cual es un importante mecanismo de amplificación de la respuesta alérgica que conecta la IgE con la inflamación celular propia de la fase tardía de la misma, presente por ejemplo en el asma. Los autores encuentran que los sueros con valores bajos de IgE a Der p 2, no son capaces de desatar el mecanismo FAP y solo con la ayuda de dos anticuerpos IgE diferentes, de alta afinidad ambos (o sea, de mayor fuerza en la unión antígeno anticuerpo), se produce una amplificación significativa de dicha reacción y la activación subsecuente de linfocitos T.
Al igual que en trabajos anteriores la elevación de los niveles de IgE sérica estuvo acompañada de la ampliación del repertorio de epítopes reconocidos. Sin embargo, un aporte  importante de este estudio ha sido la demostración que la clonalidad IgE (o sea, el repertorio) más que la afinidad de estos anticuerpos controla el mecanismo FAP, especialmente para los anticuerpos de baja y media afinidad. También, la complejidad del repertorio IgE (clonalidad más afinidad) influye en la capacidad inhibitoria de los anticuerpos IgG hacia el mecanismo FAP.
Las implicaciones clínicas de este hallazgo radican en una mejor comprensión de la inmunoterapia alergeno-específica. Así, en los pacientes con un repertorio IgE más simple en cuanto a clonalidad y afinidad  (al inicio del proceso de avance de la enfermedad) la inmunoterapia sería más efectiva en cuanto a cambiar el curso de la enfermedad alérgica, lo cual concuerda con las experiencias clínicas. También el estudio ayuda a comprender mejor la falta de completa correspondencia entre el diagnóstico in-vitro basado en la determinación solamente de la concentración de IgE específica con las pruebas cutáneas con alergenos y con la manifestación clínica de la enfermedad alérgica en sus diferentes facetas. Estudios futuros, seguramente permitirán desarrollar métodos más precisos para caracterizar la complejidad del repertorio IgE y predecir la reacción alérgica del paciente.

Por Alexis Labrada, DrC

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Reactivo empleado comúnmente en los inmunoensayos que consiste en un anticuerpo unido covalentemente a una enzima u otro compuesto marcador. También se emplean los conjugados a proteínas portadoras para incrementar la inmunogenicidad de péptidos o polipéptidos pequeños.

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Acrónimo de “Enzyme-Linked-Immuno-Sorbent-Assay” que puede traducirse como ensayo inmunoenzimático sobre fase sólida. Pare el mismo se emplea comúnmente placas de poliestireno como inmunoadsorbente para inmovilizar antígenos o anticuerpos y la reacción es revelada en su último paso mediante un anticuerpo o ligando conjugado con una enzima, la cual reacciona con un sustrato cromogénico o fluorescente.

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Nivel de aticuerpos igE séricos de específicos a determinado alérgeno. Dícese también del inmunoensayo que lo determina. Es la técnica por excelencia para el diagnóstico alérgeno-específico in-vitro.